Javascript ass am Moment an Ärem Browser deaktivéiert.Wann Javascript deaktivéiert ass, funktionnéieren e puer Funktiounen vun dëser Websäit net.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Department of Science, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Katalounien, Spuenien * Dës Auteuren hunn e puer Abléck an dëst Wierk Equal Bäitrag Hannergrond: Hyaluronsäure (HA) ass en natierlecht geschitt Polysaccharid, deen an der Produktioun vun dermale Filler fir ästheteschen Zwecker benotzt gëtt.Well et eng Hallefzäit vun e puer Deeg a mënschleche Stoffer huet, ginn HA-baséiert Dermal Filler chemesch modifizéiert fir hiert Liewen am Kierper ze verlängeren.Déi heefegst Modifikatioun a kommerziellen HA-baséiert Filler ass d'Benotzung vum 1,4-Butanandiol Diglycidylether (BDDE) als Crosslinking Agent fir d'HA Ketten ze crosslink.Rescht oder onreagéiert BDDE gëtt als net-gëfteg bei <2 Deeler pro Millioun (ppm) ugesinn;dofir, de Reschtoffall BDDE an der Finale dermal Filler muss quantifizéiert ginn Patient Sécherheet ze garantéieren.Materialien a Methoden: Dës Etude beschreift d'Detektioun an d'Charakteriséierung vun engem Nebenprodukt vun der Cross-linking Reaktioun tëscht BDDE an HA ënner alkalesche Bedéngungen duerch Kombinatioun vu Flëssegchromatographie a Massespektrometrie (LC-MS).Resultater: No verschiddenen Analysen gouf festgestallt datt d'alkalesch Bedéngungen an d'Héichtemperatur, déi benotzt gi fir den HA-BDDE Hydrogel ze Desinfizéieren, d'Bildung vun dësem neie Nebenprodukt, der "propylene glycol-ähnlecher" Verbindung, förderen.LC-MS Analyse huet bestätegt datt de Nebenprodukt déiselwecht monoisotopesch Mass wéi BDDE huet, eng aner Retentiounszäit (tR), an eng aner UV Absorptioun (λ = 200 nm) Modus.Am Géigesaz zu BDDE gouf et an der LC-MS Analyse beobachtet datt ënner de selwechte Miessbedéngungen dëst Nebenprodukt eng méi héich Detektiounsquote bei 200 nm huet.Fazit: Dës Resultater weisen datt et keen Epoxid an der Struktur vun dëser neier Verbindung ass.D'Diskussioun ass op fir de Risiko vun dësem neie Nebenprodukt ze bewäerten, deen an der Produktioun vun HA-BDDE Hydrogel (HA Dermal Filler) fir kommerziell Zwecker fonnt gëtt.Schlësselwieder: Hyaluronsäure, HA Dermal Filler, Cross-linked Hyaluronsäure, BDDE, LC-MS Analyse, BDDE Nebenprodukt.
Filler baséiert op Hyaluronsäure (HA) sinn déi heefegst a populär dermal Filler déi fir kosmetesch Zwecker benotzt ginn.1 Dësen dermale Filler ass en Hydrogel, normalerweis aus >95% Waasser an 0,5-3% HA, wat hinnen eng gelähnlech Struktur gëtt.2 HA ass e Polysaccharid an den Haaptkomponent vun der extrazellulärer Matrix vu Wirbeldéieren.Ee vun den Ingredienten.Et besteet aus (1,4)-Glukuronsäure-β (1,3)-N-Acetylglucosamin (GlcNAc) widderhuelende Disaccharidenenheeten verbonne mat glycosidesche Bindungen.Dëst Disaccharid Muster ass d'selwecht an all Organismen.Am Verglach mat e puer Protein-baséiert Filler (wéi Kollagen), mécht dës Eegeschafte HA eng héich biokompatibel Molekül.Dës Filler kënnen Aminosaier Sequenz Spezifizitéit weisen, déi vum Immunsystem vum Patient unerkannt kënne ginn.
Wann se als dermaler Filler benotzt gëtt, ass d'Haaptbeschränkung vum HA säi séieren Ëmsaz an de Stoffer wéinst der Präsenz vun enger spezifescher Famill vun Enzyme genannt Hyaluronidasen.Bis elo sinn e puer chemesch Ännerungen an der HA Struktur beschriwwe ginn fir d'Hallefzäit vun HA an Stoffer ze erhéijen.3 Déi meescht vun dëse Modifikatioune probéieren den Zougang vun Hyaluronidase zu Polysaccharidpolymeren ze reduzéieren andeems HA Ketten vernetzt ginn.Dofir, duerch d'Bildung vu Brécke an den intermolekuläre kovalente Bindungen tëscht der HA Struktur an dem Cross-linking Agent, produzéiert de cross-linked HA Hydrogel méi Anti-Enzym Degradatiounsprodukter wéi den natierlechen HA.4-6
Bis elo sinn déi chemesch Crosslinking Agenten, déi benotzt gi fir vernetzt HA ze produzéieren, enthalen Methacrylamid, 7 Hydrazid, 8 Carbodiimid, 9 Divinylsulfon, 1,4-Butandiol Diglycidyl Ether (BDDE) A Poly(ethylene glycol) Diglycidyl Ether.10,11 BDDE ass de Moment am meeschte benotzte Crosslinking Agent.Och wann dës Aarte vu Hydrogelen zënter Joerzéngte sécher bewisen sinn, sinn d'Verknüpfungsmëttelen déi benotzt gi reaktiv Reagenz, déi zytotoxesch an, an e puer Fäll, mutagenesch kënne sinn.12 Dofir muss hire Reschtgehalt am finalen Hydrogel héich sinn.BDDE gëtt als sécher ugesinn wann d'Reschtkonzentratioun manner wéi 2 Deeler pro Millioun (ppm) ass.4
Et gi verschidde Methoden fir BDDE Konzentratioun vu nidderegen Reschter, Cross-linking Grad a Substitutiounspositioun an HA Hydrogelen z'entdecken, sou wéi Gaschromatographie, Gréisst Ausgrenzungschromatographie gekoppelt mat Massespektrometrie (MS), Nuklearmagnetesch Resonanz (NMR) Fluoreszenzmiessmethoden, an Diode Array gekoppelt High Performance Liquid Chromatography (HPLC).13-17 Dës Etude beschreift d'Detektioun an d'Charakteriséierung vun engem Nebenprodukt am endgülteg vernetzte HA Hydrogel produzéiert duerch d'Reaktioun vu BDDE an HA ënner alkalesche Bedéngungen.HPLC a Flëssegchromatographie-Massspektrometrie (LC-MS Analyse).Well d'Toxizitéit vun dësem Nebenprodukt vu BDDE onbekannt ass, empfehle mir datt seng Reschtquantifikatioun op eng ähnlech Manéier wéi d'Method bestëmmt gëtt, déi normalerweis op BDDE am Endprodukt gemaach gëtt.
Dat kritt Natrium Salz vun HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japan) huet e Molekulare Gewiicht vun ~1,368,000 Da (Laurent Method) 18 an eng intrinsesch Viskositéit vun 2,20 m3 / kg.Fir d'crosslinking Reaktioun, BDDE (≥95%) war aus Sigma-Aldrich Co kaaft (St. Louis, MO, USA).Phosphat gebufferte Salins mat pH 7,4 gouf vun der Sigma-Aldrich Company kaaft.All Léisungsmëttelen, Acetonitril a Waasser benotzt an der LC-MS Analyse goufen aus HPLC Schouljoer Qualitéit kaaft.Mieresäure (98%) gëtt als Reagensgrad kaaft.
All Experimenter goufen op engem UPLC Acquity System gesuergt (Waters, Milford, MA, USA) a verbonne mat engem API 3000 Triple quadrupole Mass spektrometer equipéiert mat enger electrospray Ioniséierung Quell (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
D'Synthese vu vernetzten HA Hydrogelen gouf gestart andeems 198 mg BDDE zu enger 10% (w/w) Natriumhyaluronat (NaHA) Léisung an der Präsenz vun 1% Alkali (Natriumhydroxid, NaOH) bäigefüügt gouf.Déi lescht BDDE Konzentratioun an der Reaktiounsmëschung war 9,9 mg / ml (0,049 mM).Duerno gouf d'Reaktiounsmëschung grëndlech gemëscht an homogeniséiert an erlaabt fir 4 Stonnen bei 45 ° C weiderzemaachen.19 De pH vun der Reaktioun gëtt bei ~12 gehal.
Duerno gouf d'Reaktiounsmëschung mat Waasser gewascht, an de finalen HA-BDDE Hydrogel gouf gefiltert a verdünnt mat PBS Puffer fir eng HA Konzentratioun vun 10 bis 25 mg / ml ze erreechen, an e finalen pH vun 7,4.Fir déi produzéiert vernetzt HA Hydrogelen ze steriliséieren, ginn all dës Hydrogelen autoklavéiert (120 ° C fir 20 Minutten).De gereinegt BDDE-HA Hydrogel gëtt bei 4 ° C bis Analyse gespäichert.
Fir d'BDDE präsent am vernetzten HA-Produkt ze analyséieren, gouf eng 240 mg Probe gewien an an d'Mëttloch agefouert (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; Volumen 0,5 ml) an centrifugéiert bei 10.000 rpm bei Raumtemperatur 10 Minutten.Insgesamt 20 μL Pull-Down Flëssegkeet gouf gesammelt an analyséiert.
Fir den BDDE Standard (Sigma-Aldrich Co) ënner alkalesche Bedéngungen (1%, 0,1% an 0,01% NaOH) z'analyséieren, wann déi folgend Konditioune erfëllt sinn, ass d'Flëssegkeetsprobe 1:10, 1:100, oder bis zu 1: 1.000.000 Wann néideg, benotzt MilliQ deioniséiertem Waasser fir Analyse.
Fir d'Ausgangsmaterialien, déi an der Cross-linking Reaktioun benotzt ginn (HA 2%, H2O, 1% NaOH, an 0,049 mM BDDE), gouf 1 ml vun all Probe aus dëse Materialien virbereet mat de selwechte Analysebedéngungen analyséiert.
Fir d'Spezifizitéit vun de Peaks ze bestëmmen, déi an der Ionkaart erscheinen, gouf 10 μL vun 100 ppb BDDE Standardléisung (Sigma-Aldrich Co) an d'20 μL Probe bäigefüügt.An dësem Fall ass d'final Konzentratioun vum Standard an all Prouf 37 ppb.
Als éischt, preparéiert eng BDDE Stammléisung mat enger Konzentratioun vun 11.000 mg / L (11.000 ppm) andeems Dir 10 μL Standard BDDE (Sigma-Aldrich Co) mat 990 μL MilliQ Waasser (Dicht 1,1 g / ml) verdünnt.Benotzt dës Léisung fir eng 110 µg/L (110 ppb) BDDE Léisung als Zwëschenstandardverdünnung ze preparéieren.Dann benotzt den Zwëschen BDDE Standardverdünnung (110 ppb) fir d'Standardkurve virzebereeden andeems Dir d'Mëttelverdünnung e puer Mol verdënnt fir déi gewënscht Konzentratioun vu 75, 50, 25, 10 an 1 ppb z'erreechen.Wéi an der Figur 1 gewisen, ass et festgestallt datt d'BDDE Standardkurve vun 1.1 bis 110 ppb gutt Linearitéit huet (R2> 0.99).D'Standardkurve gouf a véier onofhängegen Experimenter widderholl.
Figur 1 BDDE Standard Eechung Kéier vun LC-MS Analyse kritt, an deem eng gutt Korrelatioun observéiert ass (R2> 0,99).
Ofkierzungen: BDDE, 1,4-Butandiol-diglycidylether;LC-MS, Flëssegkeetschromatographie a Massespektrometrie.
Fir d'BDDE Standarden ze identifizéieren an ze quantifizéieren, déi am vernetzten HA an de BDDE Standarden an der Basisléisung present sinn, gouf LC-MS Analyse benotzt.
D'chromatographesch Trennung gouf op enger LUNA 2.5 µm C18(2)-HST Kolonn (50 × 2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) erreecht a bei Raumtemperatur (25 ° C) während der Analyse gehal.Déi mobil Phase besteet aus Acetonitril (Léisungsmëttel A) a Waasser (Léisungsmëttel B) mat 0,1% Mieresäure.Déi mobil Phase gëtt duerch Gradientelutioun eluéiert.De Gradient ass wéi follegt: 0 Minutten, 2% A;1 Minutt, 2% A;6 Minutten, 98% A;7 Minutten, 98% A;7,1 Minutten, 2% A;10 Minutten, 2% A. D'Laafzäit ass 10 Minutten an d'Injektiounsvolumen ass 20 µL.D'Retentiounszäit vu BDDE ass ongeféier 3,48 Minutten (rangéiert vun 3,43 bis 4,14 Minutten baséiert op Experimenter).Déi mobil Phase gouf mat enger Flowrate vun 0,25 ml / min fir LC-MS Analyse gepompelt.
Fir BDDE Analyse a Quantifizéierung vu MS gëtt den UPLC System (Waters) kombinéiert mat engem API 3000 Triple Quadrupole Mass Spectrometer (AB SCIEX) ausgestatt mat enger Elektrospray Ioniséierungsquell, an d'Analyse gëtt am positiven Ion Modus (ESI +) gemaach.
Laut der Ionfragmentanalyse, déi op BDDE gemaach gouf, gouf de Fragment mat der héchster Intensitéit festgestallt datt de Fragment entsprécht 129,1 Da (Dorënner 6).Dofir, am Multi-Ion Iwwerwaachungsmodus (MIM) fir d'Quantifizéierung, ass d'Masskonversioun (Mass-zu-Ladeverhältnis [m/z]) vu BDDE 203,3/129,1 Da.Et benotzt och Voll Scan (FS) Modus a Produktion Scan (PIS) Modus fir LC-MS Analyse.
Fir d'Spezifizitéit vun der Method z'iwwerpréiwen, gouf eng eidel Probe (initial mobil Phase) analyséiert.Kee Signal gouf an der eidel Prouf mat enger Mass Konversioun vun 203.3/129.1 Da fonnt.Wat d'Widderhuelbarkeet vum Experiment ugeet, goufen 10 Standardinjektiounen vu 55 ppb (an der Mëtt vun der Kalibrierungskurve) analyséiert, wat zu enger Reststandarddeviatioun (RSD) <5% (Donnéeën net gewisen).
De Rescht BDDE Inhalt gouf an aacht verschidden autoklavéiert BDDE vernetzt HA Hydrogelen quantifizéiert, entspriechend véier onofhängeg Experimenter.Wéi an der Rubrik "Material a Methoden" beschriwwe gëtt, gëtt d'Quantifizéierung duerch den Duerchschnëttswäert vun der Regressiounskurve vun der BDDE Standardverdünnung evaluéiert, wat dem eenzegaartege Peak entsprécht, deen am BDDE Massentransitioun vun 203.3 / 129.1 Da festgestallt gouf, mat enger Retentioun. Zäit vun 3,43 ze 4,14 Minutten Net waarden.Figur 2 weist e Beispill Chromatogramm vum 10 ppb BDDE Referenzstandard.Table 1 resüméiert de Rescht BDDE Inhalt vun aacht verschiddene Hydrogelen.De Wäertberäich ass 1 bis 2,46 ppb.Dofir ass déi reschtlech BDDE Konzentratioun an der Probe fir mënschlech Benotzung akzeptabel (<2 ppm).
Figur 2 Ion chromatogram vun 10 ppb BDDE Referenz Norm (Sigma-Aldrich Co), MS (m /z) Transitioun kritt duerch LC-MS Analyse vun 203.30 / 129.10 Da (am positive MRM Modus).
Ofkierzungen: BDDE, 1,4-Butandiol-diglycidylether;LC-MS, Flëssegkeetschromatographie a Massespektrometrie;MRM, Multiple Reaktioun Iwwerwaachung;MS, Mass;m/z, Mass-zu-Lade-Verhältnis.
Notiz: Echantillon 1-8 sinn autoklavéiert BDDE vernetzt HA Hydrogelen.De Reschtbetrag vu BDDE am Hydrogel an den Héichpunkt vun der BDDE Retentiounszäit ginn och gemellt.Schlussendlech gëtt och d'Existenz vun neie Peaks mat verschiddene Retentiounszäiten gemellt.
Ofkierzungen: BDDE, 1,4-Butandiol-diglycidylether;HA, Hyaluronsäure;MRM, Multiple Reaktioun Iwwerwaachung;tR, Retentiounszäit;LC-MS, Flëssegkeetschromatographie a Massespektrometrie;RRT, relativ Retentiounszäit.
Iwwerraschend huet d'Analyse vum LC-MS Ionchromatogramm gewisen datt op Basis vun all den autoklavéierten vernetzte HA Hydrogel Echantillon analyséiert gouf et en extra Peak bei der méi kuerzer Retentiounszäit vun 2,73 bis 3,29 Minutten.Zum Beispill, Figur 3 weist den Ionchromatogramm vun enger vernetzten HA-Probe, wou en zousätzleche Peak bei enger anerer Retentiounszäit vun ongeféier 2,71 Minutten erschéngt.D'observéiert relativ Retentiounszäit (RRT) tëscht dem nei observéierten Héichpunkt an dem Peak vu BDDE gouf fonnt 0,79 (Table 1).Well mir wëssen datt den nei observéierten Héichpunkt manner an der C18 Kolonn zréckbehale gëtt, déi an der LC-MS Analyse benotzt gëtt, kann den neie Peak zu enger méi polare Verbindung wéi BDDE entspriechen.
Figur 3 Ion chromatogram vun Kräiz-verbonne HA hydrogel Prouf vun LC-MS kritt (MRM Mass Konversioun 203,3 / 129,0 Da).
Ofkierzungen: HA, Hyaluronsäure;LC-MS, Flëssegkeetschromatographie a Massespektrometrie;MRM, Multiple Reaktioun Iwwerwaachung;RRT, relativ Retentiounszäit;tR, Retentiounszäit.
Fir d'Méiglechkeet auszeschléissen datt déi nei observéiert Peaks Verunreiniger sinn, déi ursprénglech an de benotzte Rohmaterialien präsent sinn, goufen dës Matière première och mat der selwechter LC-MS Analysemethod analyséiert.D'Ausgangsmaterialien analyséiert enthalen Waasser, 2% NaHA am Waasser, 1% NaOH am Waasser, a BDDE an der selwechter Konzentratioun déi an der Cross-linking Reaktioun benotzt gëtt.Den Ionchromatogramm vum benotzte Startmaterial huet keng Verbindung oder Peak gewisen, a seng Retentiounszäit entsprécht dem observéierten neie Peak.Dës Tatsaach verschwënnt d'Iddi datt net nëmmen d'Ausgangsmaterial Verbindungen oder Substanzen enthalen kann, déi d'Analyseprozedur stéieren, awer et gëtt keen Zeeche vu méiglecher Kräizkontaminatioun mat anere Laboprodukter.D'Konzentratiounswäerter, déi no der LC-MS Analyse vu BDDE an neie Peaks kritt goufen, ginn an der Tabell 2 (Proben 1-4) an dem Ionchromatogramm an der Figur 4 gewisen.
Bemierkung: Echantillon 1-4 entspriechen de Rohmaterialien déi benotzt gi fir autoklavéiert BDDE vernetzt HA Hydrogelen ze produzéieren.Dës Proben goufen net autoklavéiert.
Ofkierzungen: BDDE, 1,4-Butandiol-diglycidylether;HA, Hyaluronsäure;LC-MS, Flëssegkeetschromatographie a Massespektrometrie;MRM, Multiple Reaktioun Iwwerwaachung.
Figur 4 entsprécht dem LC-MS Chromatogramm vun enger Probe vum Rohmaterial, deen an der Cross-linking Reaktioun vun HA a BDDE benotzt gëtt.
Notiz: All dës gi gemooss an der selwechter Konzentratioun a Verhältnis benotzt fir d'Verknüpfungsreaktioun auszeféieren.D'Zuelen fir d'Rohmaterialien, déi vum Chromatogramm analyséiert goufen, entspriechen: (1) Waasser, (2) 2% HA-wässerlech Léisung, (3) 1% NaOH-wässerlech Léisung.LC-MS Analyse gëtt fir Mass Konversioun vun 203.30 / 129.10 Da (am positive MRM Modus) gesuergt.
Ofkierzungen: BDDE, 1,4-Butandiol-diglycidylether;HA, Hyaluronsäure;LC-MS, Flëssegkeetschromatographie a Massespektrometrie;MRM, Multiple Reaktioun Iwwerwaachung.
D'Konditiounen, déi zu der Bildung vun neie Peaks gefouert hunn, goufen studéiert.Fir ze studéieren, wéi d'Reaktiounsbedéngungen, déi benotzt gi fir de vernetzten HA-Hydrogel ze produzéieren, d'Reaktivitéit vum BDDE-Verknüpfungsmëttel beaflossen, wat zu der Bildung vun neie Peaks (méiglecher Nieweprodukter) féiert, goufen verschidde Miessunge gemaach.An dësen Bestëmmungen hu mir de finalen BDDE Crosslinker studéiert an analyséiert, dee mat verschiddene Konzentratioune vun NaOH (0%, 1%, 0,1%, an 0,01%) an engem wässerleche Medium behandelt gouf, gefollegt vun oder ouni Autoklave.D'Bakterieprozedur fir déiselwecht Konditiounen ze simuléieren ass d'selwecht wéi d'Method déi benotzt gëtt fir de vernetzten HA Hydrogel ze produzéieren.Wéi an der Rubrik "Material a Methoden" beschriwwen, war de Mass Transitioun vun der Prouf vun LC-MS zu 203.30/129.10 Da analyséiert.D'BDDE an d'Konzentratioun vum neie Peak ginn berechent, an d'Resultater ginn an der Table 3 gewisen. Keen nei Peaks goufen an de Proben festgestallt, déi net autoklavéiert goufen, onofhängeg vun der Präsenz vun NaOH an der Léisung (Proben 1-4, Table) 3).Fir autoklavéiert Echantillon ginn nei Peaks nëmmen an der Präsenz vun NaOH an der Léisung festgestallt, an d'Bildung vum Peak schéngt ofhängeg vun der NaOH Konzentratioun an der Léisung (Proben 5-8, Table 3) (RRT = 0,79).Figur 5 weist e Beispill vun engem Ionchromatogramm, weist zwee autoklavéiert Proben an der Präsenz oder der Verontreiung vu NAOH.
Ofkierzungen: BDDE, 1,4-Butandiol-diglycidylether;LC-MS, Flëssegkeetschromatographie a Massespektrometrie;MRM, Multiple Reaktioun Iwwerwaachung.
Bemierkung: Den Top Chromatogramm: D'Probe gouf mat 0,1% NaOH wässerlech Léisung behandelt an autoklavéiert (120 ° C fir 20 Minutten).Bottom chromatogram: D'Probe gouf net mat NaOH behandelt, awer ënner de selwechte Konditiounen autoklavéiert.D'Mass Konversioun vun 203.30 / 129.10 Da (am positiven MRM Modus) war vun LC-MS analyséiert.
Ofkierzungen: BDDE, 1,4-Butandiol-diglycidylether;LC-MS, Flëssegkeetschromatographie a Massespektrometrie;MRM, Multiple Reaktioun Iwwerwaachung.
An all autoclaved Echantillon, mat oder ouni NaOH, war d'BDDE Konzentratioun staark reduzéiert (bis zu 16,6 Mol) (Prouwen 5-8, Table 2).D'Ofsenkung vun der BDDE Konzentratioun kann wéinst der Tatsaach sinn datt bei héijen Temperaturen Waasser als Basis (Nukleophil) handele kann fir den Epoxidring vu BDDE opzemaachen fir eng 1,2-Diolverbindung ze bilden.D'monoisotopesch Qualitéit vun dëser Verbindung ass anescht wéi déi vu BDDE an dofir wäert net beaflosst ginn.LC-MS entdeckt eng Mass Verréckelung vun 203.30/129.10 Da.
Endlech weisen dës Experimenter datt d'Generatioun vun neie Peaks hänkt vun der Präsenz vu BDDE, NAOH an dem Autoklaveprozess of, awer huet näischt mat HA ze dinn.
Den neie Peak fonnt bei enger Retentiounszäit vun ongeféier 2,71 Minutten gouf dunn duerch LC-MS charakteriséiert.Fir dësen Zweck gouf BDDE (9,9 mg /ml) an enger 1% NaOH wässerlecher Léisung inkubéiert an autoklavéiert.An Table 4, sinn d'Charakteristiken vun der neier Héichpunkt mat der bekannt BDDE Referenz Peak Verglach (Retentioun Zäit ongeféier 3,47 Minutten).Baséierend op d'Ionfragmentéierungsanalyse vun den zwee Peaks, kann et ofgeschloss ginn datt de Peak mat enger Retentiounszäit vun 2,72 Minuten déiselwecht Fragmenter wéi de BDDE Peak weist, awer mat verschiddenen Intensitéiten (Dorënner 6).Fir den Héichpunkt entsprécht der Retentiounszäit (PIS) vun 2,72 Minutten, gouf e méi intensiven Héichpunkt no der Fragmentatioun bei enger Mass vun 147 Da beobachtet.Bei der BDDE Konzentratioun (9.9 mg /ml) déi an dëser Bestëmmung benotzt gouf, goufen verschidden Absorptiounsmodi (UV, λ = 200 nm) am ultraviolette Spektrum och no der chromatografescher Trennung observéiert (Dorënner 7).De Peak mat enger Retentiounszäit vun 2,71 Minutten ass nach ëmmer bei 200 nm ze gesinn, während de BDDE Peak net am Chromatogramm ënner de selwechte Konditiounen observéiert ka ginn.
Table 4 Charakteriséierungsresultater vum neie Peak mat enger Retentiounszäit vun ongeféier 2,71 Minutten an dem BDDE Peak mat enger Retentiounszäit vun 3,47 Minutten
Bemierkung: Fir dës Resultater ze kréien, goufen LC-MS an HPLC Analysen (MRM a PIS) op den zwee Peaks gemaach.Fir HPLC Analyse gëtt UV Detektioun mat enger Wellelängt vun 200 nm benotzt.
Ofkierzungen: BDDE, 1,4-Butandiol-diglycidylether;HPLC, High-Performance Liquid Chromatography;LC-MS, Flëssegkeetschromatographie a Massespektrometrie;MRM, Multiple Reaktioun Iwwerwaachung;m/z, Mass-zu-Lade Verhältnis;PIS, Produit Ion Scannen;ultraviolet Liicht, ultraviolet Liicht.
Notiz: D'Massfragmenter ginn duerch LC-MS Analyse (PIS) kritt.Top chromatogram: Mass Spektrum vun BDDE Standard Echantillon Fragmenter.Bottom chromatogram: De Massespektrum vum neie Peak entdeckt (RRT assoziéiert mam BDDE Peak ass 0,79).BDDE gouf an 1% NaOH Léisung veraarbecht an autoklavéiert.
Ofkierzungen: BDDE, 1,4-Butandiol-diglycidylether;LC-MS, Flëssegkeetschromatographie a Massespektrometrie;MRM, Multiple Reaktioun Iwwerwaachung;PIS, Produktion Scan;RRT, relativ Retentiounszäit.
Figur 7 Ion Chromatogram vum 203.30 Da Virgänger Ion, an (A) den neie Peak mat enger Retentiounszäit vun 2.71 Minutten an (B) d'UV Detektioun vum BDDE Referenz Standard Peak bei 3.46 Minutten bei 200 nm.
An all de vernetzte HA-Hydrogelen, déi produzéiert goufen, gouf beobachtet datt d'Rescht BDDE Konzentratioun no der LC-MS Quantifikatioun <2 ppm war, awer en neien onbekannte Peak erschéngt an der Analyse.Dësen neie Peak entsprécht net dem BDDE Standardprodukt.De BDDE Standardprodukt huet och déiselwecht Qualitéitskonversioun (MRM Konversioun 203.30 / 129.10 Da) Analyse am positiven MRM Modus gemaach.Allgemeng ginn aner analytesch Methoden wéi Chromatographie als Limit Tester benotzt fir BDDE an Hydrogelen z'entdecken, awer déi maximal Detektiounslimit (LOD) ass liicht manner wéi 2 ppm.Op der anerer Säit, bis elo, NMR a MS goufen benotzt fir de Grad vun der Cross-linking an / oder Modifikatioun vun HA an den Zocker Eenheet Fragmenter vun cross-linked HA Produkter ze charakteriséieren.Den Zweck vun dësen Techniken war ni fir d'Residualiséierung vun der BDDE bei esou niddrege Konzentratioune wéi mir an dësem Artikel beschreiwen (LOD vun eiser LC-MS Method = 10 ppb) ze quantifizéieren.
Post Zäit: Sep-01-2021